悬浮细胞mtt实验是一种常见的细胞毒性检测方法，通过测量细胞对mtt试剂的代谢来评估细胞的活力和生长情况。本文将介绍悬浮细胞mtt实验的具体步骤和注意事项，以及分析实验结果的方法。

一、实验材料

1. mtt试剂： 5mg/ml浓度，需在PBS中稀释至1mg/ml。

2. DMSO： 无菌过滤，用于溶解mtt形成的结晶物。

3. 细胞培养基： 包括基础培养基和相应的添加剂（例如，10%的胎牛血清）。

4. 细胞株： 选择合适的悬浮细胞株，如K562、HL-60等。

5. 96孔板： 用于培养和检测细胞。

6. 离心管： 用于收集细胞。

7. 离心机： 用于离心细胞。

8. 显微镜： 用于观察细胞形态和数量。

二、实验步骤

1. 细胞处理

将悬浮细胞培养至对数生长期，用PBS洗涤细胞，离心300g，5分钟。去除上清液，重新悬浮细胞至适当浓度（如1×10^5）。

2. 细胞培养

将细胞悬浮于96孔板内，每孔加入100μl细胞悬浮液。在37℃、5%CO2的恒温培养箱内孵育24小时，使细胞附着于孔板壁面。

3. 加入mtt试剂

取出96孔板，将每孔上清液抽出。向每孔加入100μl预先稀释好的mtt试剂，使细胞与mtt试剂充分接触。

4. 形成紫色晶体

将孔板放回恒温培养箱内继续孵育4小时，使细胞代谢mtt，形成紫色结晶物。

5. 溶解结晶物

去除上清液，加入150μl DMSO，用振荡器轻轻振荡，使结晶物完全溶解。

6. 测量吸光度

将孔板放入酶标仪内，以570nm波长测量吸光度值。同时，在630nm波长下作为参考波长，用于消除杂质对结果的影响。

三、注意事项

1. 细胞密度不能过低或过高，应根据细胞类型选择适当浓度。

2. mtt试剂需在PBS中充分稀释，否则会对细胞造成毒性影响。

3. 离心过程应轻柔，以避免对细胞造成损伤。

4. 细胞培养时间应掌握好，过短会导致细胞不足，过长会导致细胞过度增殖。

5. 溶解结晶物时应充分振荡，以确保完全溶解。

四、实验结果分析

通过比较实验组与对照组的吸光度值，可判断细胞的活力和生长情况。吸光度值越高，代表细胞的活力越强，生长情况越好。反之，吸光度值越低，则代表细胞的活力越弱。通过量化分析，可得出不同处理条件下的细胞毒性差异。

悬浮细胞mtt实验是一种简单、快速、可靠的细胞毒性检测方法，可用于筛选抗肿瘤药物和评估化学物质的毒性。在实验过程中，应注意细胞处理、试剂处理等方面的细节，以确保实验结果的准确性和可靠性。

文章出自：细胞实验外包   想了解更多请关注：http://www.dj-cro.com/